利用快三Q-TOF質譜進行貝伐單抗生物類似藥抗體表征分析
Bevacizumab是重組人源化人血管內皮生長因子（VEGF）單克隆抗體，作為美國第一個獲得批準上市的抑制腫瘤血管生成的藥，可用於轉移性結直腸癌以及非鱗狀非小細胞肺癌治療等。在中國，超過10家貝伐珠單抗生物類似藥在研發上市過程中，面對生物類似藥分析，充滿技術挑戰，貝伐單抗生物類似藥表征是質量控制關鍵點之一，分析過程中，抗體肽圖分析方法尤為關鍵，今天我們就聊一聊貝伐單抗生物類似藥肽圖分析技術方法。
肽圖分析（peptide mapping）是研究抗體藥物結構組成的重要技術之一，抗體通過酶切處理後，利用色譜結合快三高分辨Q-TOF質譜LCMS-9030分析，不僅可以對蛋白質氨基酸序列進行分析，同時可以對於相應肽段的翻譯化修飾（PTM）進行分析。通過快三反相HPLC方法分離不同性質的肽段，後續肽段通過高分辨質譜進行一級和二級掃描，通過監測的母離子和子離子匹配相應的肽段氨基酸序列以及存在的修飾。肽圖分析是抗體蛋白藥物質量控制的重要手段，快三高分辨質譜可以完成相關所有的分析檢測項目。
分析儀器及色譜柱方案
01 分析儀器
LCMS-9030
LCMS-9030四極桿飛行時間質譜儀使高速度、高靈敏度的四極桿質譜與TOF技術的緊密結合。融合快三先進工程技藝的DNA，打造出速度與出色性能兼備的全新一代高分辨質譜儀，以優異表現輕松勝任定性和定量分析挑戰。
02 液相色譜柱
Shim-pack GISS-HP,3um，150*3.0 mm
● 反相肽段分析專用色譜柱
● 壽命長，耐壓高，出峰穩定
應用實例
以bevacizumab 生物類似藥為例，進行peptide mapping分析，將抗體蛋白通過胰酶酶切後，通過反相色譜質譜分離後進入高分辨Q-TOF質譜進行一級全掃描和二級掃描，高分辨數據提取分析匹配相應的肽段序列，完整流程如下圖所示。
圖.利用快三LCMS-9030抗體測序基本流程以及舉例
快三分析bevacizumab 生物類似藥序列分析，通過Shim-pack GISS-HP色譜柱（3um，150*3.0 mm），可以高效分離酶切後的輕重鏈肽段，最後用LC-MS 9030 進行一級和二級掃描，優化的參數色譜質譜參數如下表所示。
圖.利用快三LCMS-9030抗體測序詳細參數
通過軟件分析高分辨數據，進而匹配生物類似藥的重鏈和輕鏈序列，完成整個抗體的肽圖分析。因篇幅有限，以重鏈肽段序列部分數據進行展示，匹配覆蓋率100%，可以說明快三LCMS-9030 Q-TOF質譜在抗體肽段分析方面具有強大的實力。部分序列分析結果見下圖所示。
圖.bevacizumab 生物類似藥重鏈測序結果展示（部分展示）
結合前述案例，快三建立高分辨質譜LCMS-9030針對抗體藥物進行肽圖分析完整策略，此外對於分子量分析、翻譯化修飾、二硫鍵分析、糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相關抗體藥物關鍵質量屬性檢測，為用戶節能增效，創造更大價值。
